Leptospira, ДНК [ПЦР]

Синонимы русские Синонимы английские Метод исследования Какой биоматериал можно использовать для исследования?Как правильно подготовиться к исследованию?Общая информация об исследовании Для чего используется исследование?Когда назначается исследование?Что означают результаты?Что может влиять на результат?Также рекомендуется Кто назначает исследование?

Выявление возбудителя лептоспироза (Leptospira) – инфекционного заболевания, которому подвержены многие животные (в том числе собаки, кошки, домашний скот, крысы) и которое может передаваться человеку. Распространяясь с мочой и калом, микроскопического размера лептоспиры поражают органы и ткани, отравляя организм продуктами своей жизнедеятельности.

Синонимы русские

Лептоспира, ДНК [ПЦР] (моча).

Синонимы английские

Leptospira, PCR (DNA), Urine.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Первую порцию утренней мочи.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Начиная со второй недели заболевания лептоспиры накапливаются преимущественно в извитых почечных канальцах и исчезают из крови и других тканей. Такая избирательная концентрация в эпителии и межклеточном пространстве почечной ткани приводит к тяжёлым повреждениям канальцев почек и нарушению мочеобразования, а в тяжёлых случаях вызывает анурию (отсутствие мочеиспускания) и уремию (накопление в крови токсических продуктов азотистого обмена, нарушение концентрации электролитов крови и др.). Лептоспирам свойственно длительно сохраняться в почках и выделяться с мочой до 40-го дня болезни.

При персистенции лептоспир в почках признаков острой инфекции, как правило, нет, заболевание часто протекает в латентной форме.

Решающими для подтверждения диагноза «лептоспироз» в любой фазе заболевания, в том числе и на более поздних сроках инфекционного процесса, являются результаты лабораторных исследований: бактериологического (посева), серологического (определения титров специфических антител в сыворотке крови), молекулярно-генетического (определения ДНК лептоспир методом ПЦР).

Недостатком бактериологического метода является длительность проведения исследования из-за медленного роста лептоспир на питательных средах.

Серологическое исследование теряет свою значимость после 19-20-го дня болезни в связи с постепенным снижением титра сывороточных антител вследствие прекращения циркуляции лептоспир в крови. Кроме того, при тяжелом течении лептоспироза, особенно на фоне интенсивной терапии антибактериальными препаратами, антитела могут выявляться лишь спустя 2-3 месяца от начала болезни.

Также малоэффективна серологическая диагностика персистентных форм лептоспироза в связи с низким титром сывороточных антител и отсутствием его нарастания.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это молекулярно-генетический метод исследования, в ходе которого выявляется генетический материал (ДНК) лептоспиры в образце мочи. Методу свойственна высокая специфичность (100 %), чувствительность (от 10 до 1000 копий ДНК в пробе) и высокая диагностическая эффективность, даже на фоне проводимого лечения антибактериальными препаратами.

Определение ДНК лептоспир в моче методом ПЦР используется для диагностики лептоспироза на более поздних сроках заболевания – начиная с конца второй – начала третьей недели заболевания, то есть в период, когда лептоспиры располагаются преимущественно в извитых канальцах почек и исчезают из крови и тканей, а также при персистенции лептоспир в почках. Одним из основных достоинств ПЦР также является то, что она позволяет выявить возбудителя даже при условии присутствия последнего в организме в очень малых количествах.

Вместе с тем отрицательный результат ПЦР не должен быть основанием для прекращения диагностики, так как определить точно конкретную фазу заболевания не всегда возможно. Чувствительность лабораторной диагностики при лептоспирозах может быть значительно повышена за счет параллельного использования серологических тестов (определения титров антител в сыворотке крови) и метода ПЦР вне зависимости от фазы заболевания.

Для чего используется исследование?

Для диагностики лептоспироза на более поздних сроках инфекционного процесса (начиная с конца второй – начала третьей недели заболевания, когда лептоспиры накапливаются в извитых почечных канальцах и исчезают из крови и тканей).
Для дифференциальной диагностики лептоспироза с другими заболеваниями, для которых характерно поражение почек (ГЛПС, нефрозы и нефриты неинфекционной природы), развитие острой почечной недостаточности (нарушения мочеобразования, в тяжёлых случаях анурии и уремии).

Когда назначается исследование?

При диагностике лептоспироза.
При подозрении на персистенцию лептоспир в почках.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

лептоспирозная инфекция (фаза начала формирования нестерильного иммунитета – который сохраняется, пока в организме есть возбудитель инфекции, персистенция лептоспир в почках).

Причины отрицательного результата:

период полного выздоровления, когда формируется стойкий иммунитет и лептоспиры в организме уже отсутствуют.

Что может влиять на результат?

Применение некоторых противовирусных препаратов – ингибиторов полимераз – иногда приводит к ложноотрицательному результату.

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Инфекционист, нефролог, уролог, терапевт, врач общей практики, хирург, реаниматолог.

Литература

Recommendations for the detection of Leptospirain urine by PCR «Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical» 37(2):131-134, mar-abr, 2004.
Ganoza, C.A., Matthias, M.A., Saito, M., Cespedes, M., Gotuzzo, E., & Vinetz, J.M. (2010). Asymptomatic renal colonization of humans in the Peruvian Amazon by Leptospira. PLoS Neglected Tropical Diseases, 4 (2) DOI.
World Health Organization (2003) Human Leptospirosis: Guidance for diagnosis, surveillance and control.
Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами. Методические указания МУ 3.1.1128-02.
Медицинская микробиология / под ред. В. И. Покровского, О. К. Поздеева. – М.: ГЭОТАР Медицина, 1999 и др. годы издания.