Brucella species, ДНК [ПЦР]

Выявление возбудителей бруцеллёза (Brucella spp), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в моче, синовиальной жидкости, грудном молоке или образце ткани.

Синонимы русские

Бруцелла, возбудитель бруцеллёза, ундулирующей лихорадки, септицемии Брюса.

Синонимы английские

Brucella spp, DNA [Polymerase chain reaction] (urine, synovial fluid, breast milk, tissue sample), B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, грудное молоко, первую порцию утренней мочи, синовиальную жидкость.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Brucella spp – это грамотрицательные аэробные коккобациллы, являющиеся внутриклеточными паразитами человека и животных и вызывающие бруцеллёз. Они попадают в организм при употреблении сырого козьего молока и при непосредственном контакте с инфицированными тканями животных (как у ветеринаров, работников мясной промышленности, сотрудников микробиологических лабораторий). Наибольшее значение в клинике инфекционных болезней человека имеет 4 вида Brucella: B. melitensis, B. abortus, B. suis и B. canis, при этом на долю B. melitensis приходится подавляющее большинство случаев заражения. Бруцеллёз, вызванный различными видами Brucella, протекает и лечится одинаково, поэтому с клинической точки зрения нет необходимости определять видовую принадлежность возбудителя.

Бруцеллёз представляет собой системный инфекционный процесс, при котором поражаются практически все органы. Наиболее часто микроорганизм удаётся обнаружить в крови, однако другие биологические среды (моча, синовиальная жидкость) и фрагменты тканей (биоптат) также могут быть использованы для диагностики бруцеллёза. Несмотря на то что бруцеллёз считается зоонозной инфекцией, описаны случаи передачи микроорганизма от человека к человеку, в том числе случаи заражения младенцев при употреблении грудного молока больной матери. Его могут исследовать на бруцеллёз, чтобы установить источник заражения и не допустить реинфекции.

Диагностика бруцеллёза – достаточно сложная задача. Заболевание не имеет каких-либо специфических признаков, а также может протекать в бессимптомной, хронической и локализованной форме. Поэтому диагностика основана на лабораторном выявлении микроорганизма. Существует несколько способов идентификации Brucella: посев на питательную среду, серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР – это метод молекулярной диагностики, позволяющий обнаруживать в биологическом материале (например, в моче) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. Для диагностики бруцеллёза исследование с помощью ПЦР используют сравнительно недавно, однако, благодаря его преимуществам, метод находит всё большее применение в клинической практике.

Около 20-40 % случаев бруцеллёза – это локализованные формы заболевания, характеризующиеся изолированным поражением какого-либо органа, наиболее часто это орган мочеполовой, нервной системы, сердце, а также поражение сустава. Как правило, локализованный бруцеллёз – это последствие нераспознанной ранее остросептической формы. Чувствительность бактериологического метода («золотого стандарта» идентификации Brucella) при исследовании большинства биологических жидкостей не превышает 40 %. В такой ситуации ПЦР является хорошей альтернативой посеву на питательную среду: её чувствительность составляет 97-98 %. В некоторых случаях положительный результат исследования с помощью ПЦР может оказаться достаточным диагностическим критерием даже при отрицательном результате бактериологического посева и серологических тестов.

ПЦР основана на выявлении уникального для представителей рода Brucella фрагмента ДНК (гена bcsp31) и поэтому характеризуется очень высокой специфичностью. Для сравнения: большинство серологических методов выявляют антитела к общему для многих микроорганизмов липоолигосахариду, и их результаты могут быть ложноположительными при наличии инфекции Yersinia enterocolitica O:9, Salmonella urbana group N, Francisellatularensis, EscherichiacoliO:157, Stenotrophomonas maltophilia и некоторых других микроорганизмов.

Благодаря высокой специфичности положительный результат исследования с помощью ПЦР у пациента с признаками заболевания позволяет подтвердить диагноз. С другой стороны, случайно выявленный положительный результат у пациента без каких-либо жалоб и симптомов требует дальнейшего, более полного клинического и лабораторного обследования.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики остросептической, хронической и локализованных форм бруцеллёза, а также рецидива заболевания.

Когда назначается исследование?

• При симптомах бруцеллёза (остросептической формы): высокой лихорадке с температурой 39-40 °С и выше (особенно при колебаниях температуры), ознобе, потливости, слабости, миалгии, артралгии или артрите.
• При обследовании пациента с изолированным поражением мочеполовой системы и суставов при наличии в анамнезе указаний на употребление сырого козьего молока, особенно в эндемичных по бруцеллёзу районах, и профессиональных особенностей (как у ветеринаров, работников молочной и мясной промышленности).
• При подозрении на бруцеллёз у новорождённого.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• бруцеллёз;
• туберкулёз с поражением костно-суставной системы.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие бруцеллёза;
• неправильное взятие биоматериала на исследование.

Что может влиять на результат?

• Туберкулёз костно-суставной системы может приводить к ложноположительному результату.
• Применение доксициклина, рифампицина, ципрофлоксацина и других фторхинолонов способствует ложноотрицательному результату.

Важные замечания

• Результат исследования следует оценивать с учётом дополнительных анамнестических, лабораторных и инструментальных данных.

Также рекомендуется

• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
• С-реактивный белок, количественно (метод с нормальной чувствительностью)
• Mycobacterium tuberculosis complex, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, уролог, хирург, невролог, врач общей практики.

Литература

• Al Dahouk S, Nöckler K. Implications of laboratory diagnosis on brucellosis therapy. Expert Rev Anti Infect Ther. 2011 Jul;9(7):833-45.
• Yu WL, Nielsen K. Review of detection of Brucella spp. by polymerase chain reaction. Croat Med J. 2010 Aug;51(4):306-13. Review.
• Morata P, Queipo-Ortuño MI, Reguera JM, Miralles F, Lopez-Gonzalez JJ, Colmenero JD. Diagnostic yield of a PCR assay in focal complications of brucellosis. J Clin Microbiol. 2001 Oct;39(10):3743-6.
• Nimri LF. Diagnosis of recent and relapsed cases of human brucellosis by PCR assay. BMC Infect Dis. 2003 Apr 28;3:5.